Expresión y actividad de proteínas de multirresistencia a drogas (MDR) en líneas celulares de cáncer de próstata / Expression and activity of multidrug resistance proteins in prostate cancer cell lines

Introducción: Nuestro grupo ha reportado previamente una asociación entre sensibilidad a quimioterapia y la expresión de proteínas MDR (P-Gp y MRP1) en líneas celulares y cultivos primarios de cáncer de próstata, quedando por estudiar la actividad de las mismas. Material y métodos: Se utilizó líneas celulares de cáncer de próstata PC3 y DU145. Se evaluaron los niveles de mARN de P-Gp y MRP1 mediante RT-PCR. La expresión de ambas proteínas se determinó mediante inmunofluorescencia. Se estableció un ensayo funcional en base a la acumulación de sustratos fluorescentes (DiOC2(3) para P-gp y CFDA para MRP1) y al uso de inhibidores específicos para cada proteína (Ciclosporina A para P-Gp y MK571 para MRP1). Las células se incubaron durante 60 minutos a 37ºC con o sin el inhibidor específico, seguido de otra incubación por 60 minutos agregando el sustrato fluorescente. La acumulación del sustrato fluorescente se determinó por citometría de flujo. Resultados: Las líneas celulares utilizadas sólo expresaron MRP1, mientras no se detectó P-Gp (mARN ni proteína). Mediante el ensayo funcional se observó que las células acumulaban más CFDA cuando eran tratadas con MK571. No se observó diferencias en la acumulación de DiOC(2)3 frente al tratamiento con Ciclosporina A. Conclusión: La mayor acumulación intracelular de CFDA frente al tratamiento con MK571 indica que la proteína MRP1 expresada en las líneas celulares utilizadas es funcional. P-Gp no se expresa en las líneas evaluadas. En estudios en curso nos encontramos evaluando la expresión y función de ambas proteínas en cultivos primarios.

Introduction: We have previously reported an association between sensitivity to chemotherapy and the expression of multidrug resistance proteins (MDR) (P-Gp and MRP1) in cell lines and primary cultures of prostate cancer. Activity remains to be studied. Material and methods: Prostate cancer cell lines PC3 and DU145 were used. Levels of mRNA of P-Gpand MRP1 using RT-PCR, were evaluated. The expression of both proteins was determined using immunofluorescence. A functional assay based on the accumulation of fluorescence substrates (DiOC2(3) for P-Gp and CFDA for MRP1) was established. Cells were incubated for 60 minutes at 37C with/without the specific inhibitor, followed by another 60 minutes incubation adding the fluorescence substrate. Accumulation of fluorescence substrate was determined by flow citometry. Results: Cell lines expressed only MRP1, whereas P-Gp (mRNA/protein) was not detected. Using the functional assay, we found that cells accumulated more CFDA when treated with MK571. No differences were seen in the accumulation of DiOC2(3) after treatment with ciclosporin A. Conclusion: The higher intracellular accumulation of CFDA after treatment with MK571 indicates that the MRP1 protein expressed in these cell lines is functional. P-Gp was not expressed in these cell lines. We are currently evaluating the expression and function of both proteins in primary cultures.

Tendinopatía del mango rotador: análisis histológico e inmunohistoquímico / Shoulder rotator cuff tendinopathy: histological and immunohistochemical analysis

We reviewed 45 biopsies obtained from surgical patients underwent open rotator cuff tear repairs. Routine stains included Hematoxylin_Eosin (which conform the basis for scoring into Riley´s Classification to 64 percent corresponding to type III and 36 percent to type IV), Alcian Blue stain and Masson Tri-Chrome stain; in ten cases we applied immuno-histochemical techniques for PCNA, CD14, CD34 and Tenascin-C markers, using semi-quantitative methods for it analysis. Percentage vascular area measurement was 15 percent (average) for tendinopathy type Riley III and this value lessening progressively according more degenerative lesions appears in type Riley IV. Analysis of neo-angiogenesis foci indicates: a diffuse pattern of appearance, damage in pericyte sheath of neo-vessels with probabilities of developing microhaemorraghes and many inactive neo-blood-vessels. In tendinopathy Riley type IV, greatest expression of chondroid metaplasia, acellularityof tendon tissue and absence of blood vessels were common findings, notshowing signs of repair. Immunohistochemical results showed PCNA+ index in cells equivalent to 35 percent in average, but much lower index were characteristic for type IV; Tenascin-C markation was in correspondence with PCNA+ intensitystain. CD14-CD34 staining was incomplete and weak in areas of neo-angiogenesis. Overall results indicate a progressive compromise of repair capabilities according classification degree.

Se revisan 45 biopsias obtenidas de pacientes operados con cirugía abierta por ruptura completa del mango rotador. Las tinciones utilizadas incluyen H-E (utilizada para clasificar las tendinopatías en la Clasificación de Riley, 64 por ciento tipo III y 36 por ciento tipo IV), tinción de Azul Alcian y Tricrómica de Masson. 10 biopsias fueron tratadas con técnicas inmuno-histoquímicas para PCNA, CD14, CD34 y Tenascin-C y se aplicaron métodos semicuantitativos de análisis. La medición de porcentaje de área vascular mostró un 15 por ciento (promedio) para las tipo III, valor que disminuye de acuerdo a la aparición de lesiones degenerativas en las tipo IV. El análisis de los focos de neoangiogenesis indica un patrón difuso, infiltrativo, con daño en la cubierta de pericitos de los neovasos y tendencia a las micro-hemorragias, con muchos vasos inactivos. En la tendinopatía tipo IV, la aparición de mayor metaplasma condroídea, zonas acelulares y ausencia de vasos sanguíneos fueron hallazgos frecuentes y no se apreciaron signos de reparación. Los resultados inmunohistoquímicos mostraron un índice PCNA+ de 35 por ciento en promedio, encontrándose valores muy inferiores en las tipo IV. La marcación para Tenascin-C estuvo en correspondencia con el índice de PCNA+ y las marcas CD14-34 fueron incompletas y débiles en las áreas de neoangiogénesis. Evaluados en conjunto estos resultados indican un daño progresivo en la capacidad de reparación tisular a medida que transita del tipo Riley III al Riley IV.